液相色谱仪基本原理及常见故障排除

       高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记实仪等几部门组成。储液器中的活动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入活动相,被活动相载入色谱柱(固定相) 内, 因为样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经由反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记实仪,数据以图谱形式打印出来。色谱光谱仪

    2 高效液相色谱仪的应用
    高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,活动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不不乱和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
    与试样预处理技术相配合,HPL C 所达到的高分辨率和高敏捷度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。跟着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的前提下完成其分离。
    HPL C 成为解决生化分析题目最有前途的方法。因为HPL C具有高分辨率、高敏捷度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等长处,因而被广泛应用到生物化学、食物分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。光度计 
    液相色谱- 质谱连用技术受到普遍正视, 如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染分析得到新的发展。

    3 高效液相色谱仪常见故障处理
    L C - 10A T 高效液相色谱仪是日本岛津公司1996 年的产品, 检测器为可变波长紫外检测器, 色谱柱为岛津公司的ODS - C18 ,大连依利特的ODS -C18 。
    八年的日常工作中碰到了几种故障,如故障1 经咨询岛津公司的工程师后,得以解决;故障2、故障5 是频繁遇到的题目等,特作总结如下:
    故障1    活动相内有气泡, 封闭泵, 打开泄压阀, 打开p urge键, 清洗脱气, 气泡不断从过滤器冒出, 进入活动相, 不管打开p urge 键几回,都无法清除不断产生的气泡。
    原因过滤器长期陶醉于乙酸铵等缓冲液内, 过滤器内部因为霉菌的生长繁殖,形成菌团,梗阻了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经由滤器进入活动相。
    处理过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中12～36 小时, 轻轻震荡几回, 再将过滤器用纯水清洗几回, 打开泄压阀, 打开p urge 键,清洗脱气, 如仍有气泡不断从过滤器冒出, 继承将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏, 活动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1. 0～3. 0ml/ min ,纯水冲刷过滤器1 小时左右。即可将过滤器清洗干净。封闭泄压阀,纯甲醇冲刷半小时即可。
    故障2    柱压高原因(1) 缓冲液盐分如(乙酸铵等) 沉积于柱内; (2) 样品污染沉积。
    处理对于第一种情况先用40～50 ℃的纯水,低速正向冲刷柱子, 待柱压逐渐下降后, 相应进步流速冲刷, 柱压大幅度下降后, 用常温纯水冲刷, 之后用纯甲醇冲刷柱子30 分钟; 对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲刷柱子, 然后换成甲醇冲刷, 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲刷柱子(冲刷时间的是非由样品污染的情况而定) , 再用换成甲醇冲刷, 然后用纯水冲刷, 最后甲醇冲刷正向冲刷柱子30 分钟以上。
    故障3    既无压力指示,又无液体流过[1 >。
    原因(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡进入泵体。
    处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时, 用一个50ml 的玻璃针筒在泵的出口处匡助抽出空气。
    故障4    压力波动大,流量不不乱. 
    原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。
    处理工作中留意观察活动相的量, 保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,活动相要充分脱气[2 >。如为单向阀和阀座之间夹有异物, 拆下单向阀, 放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗.
    故障5    出峰不佳,峰分叉。
    原因(1) 色谱柱被污染; (2) 柱头填料塌陷。
    处理对于第一种情况, 先用纯水反向冲刷柱子, 然后换成甲醇冲刷, 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲刷柱子(冲刷时间的是非由样品污染的情况而定) , 再换成甲醇冲刷, 然后用纯水冲刷,最后甲醇冲刷正向冲刷柱子30 分钟以上。如冲刷后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部门(污染的填料) ,装入新填料, 滴一滴甲醇, 填料下陷, 再填, 用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧, 再填平, 滴甲醇, 再压紧反复几回, 直至装满填平[2 >。柱头用甲醇冲刷干净, 擦净柱外壁的填料, 拧紧柱头,用纯甲醇冲刷30 分钟以上。
    故障6    峰面积重复性不佳。
    原因(1) 进样阀漏液; (2) 加样针不到位。
    处理对于第一种情况更换进样阀垫圈; 对于第二种情况保证加样针插到底,打针样品溶液后须快速、平稳地从LOAD 状态转换到INJ EC T 状态,以保证进样量的正确。日常工作中, 液相色谱仪的保养非常重要, 如要留意不要让空气进入输液系统和高压泵中, 储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液, 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲刷干净,防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质, 完全溶解, 尽量减少对色谱柱的污染, 以延长色谱柱的使用寿命, 同时避免打针过浓的样品溶液, 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞; 色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
文章链接：中国化工仪器网 http://www.chem17.com/Tech_news/detail/214712.html